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              有關(guān)實(shí)驗中影響ELISA標本的內源性物質(zhì)詳解

              更新時(shí)間:2024-04-01      瀏覽次數:137

              血清是常用的ELISA實(shí)驗標本,血漿一般可視為與血清同等的標本,標本引起的假陽(yáng)性和假陰性結果主要是干擾性物質(zhì)所致,影響的內源性物質(zhì)具體講解如下:
              首先有人認為大約40%的人血清標本中含有非特異性干擾物質(zhì),它可以不同程度影響檢測結果。然而常見(jiàn)的干擾物質(zhì)有:類(lèi)風(fēng)濕因子、補體、嗜異 性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫源性誘導的抗鼠Ig ( s )抗體、交叉反應物質(zhì)和其它物質(zhì)等。因此我們根據這幾種物質(zhì)來(lái)詳細解說(shuō)下:
              1、類(lèi)風(fēng)濕因子
              人血清中IgM、IgG型類(lèi)風(fēng)濕因子(RF)可以與ELISA系統中的捕捉抗體及酶標記二抗的FC段直接結合,從而導致假陽(yáng)性。解決該情況的辦法是:①用F(ab)2替代完整的IgG;②標本用聯(lián)有熱變性(63℃,10 min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標本稀釋液中同樣有效);③檢測抗原時(shí),可以用2 - 巰基乙醇等加入到標本 稀釋液中,使RF降解。
              2、補體
              ELISA系統中固相一抗和標記二抗過(guò)程中,抗體分子發(fā)生變構,其FC段的補體C1q分子結合位點(diǎn)被暴露出來(lái),使C1q 可以將二者連接起來(lái),從而造成假陽(yáng)性。解決的辦法是:①用EDTA稀釋標本;②用53℃,10 min或56℃,30 min加熱血清使C1q滅活。
              3、嗜異性抗體
              人類(lèi)血清中含有能與嚙齒類(lèi)動(dòng)物(如鼠等)Ig ( s ) 結合的天然嗜異性抗體,可將ELISA系統中一抗和二抗連接起來(lái),也能造成假陽(yáng)性。解決的辦法是:可在標本稀釋液中加入過(guò)量的動(dòng) 物Ig ( s ) ,但加入量不足或亞類(lèi)不同時(shí)無(wú)效。
              4、嗜靶抗原的自身抗體
              抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體,有時(shí)能與靶抗原結合形成復合物,在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定結果。為避免以上情況出現,解決的辦法是:測定前需用理化方法將其解離后再測定。
              5、醫源性誘導的抗鼠Ig ( s )抗體
              臨床開(kāi)展的用鼠源性CD3等單克隆抗體治療,用放射性同位素標記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術(shù),均有可能使這些病人體 內產(chǎn)生抗鼠抗體;另外,被鼠等嚙齒類(lèi)動(dòng)物咬傷的病人體內也可以產(chǎn)生抗鼠Ig ( s )抗體。這些病人ELISA測定時(shí)均可產(chǎn)生假陽(yáng)性。解決的辦法是:測定抗原時(shí),在標本中加入足量的正常鼠Ig ( s ) ,從而克服由于上述原因造成的假陽(yáng)性。
              6、交叉反應物質(zhì)
              類(lèi)de高辛、類(lèi)AFP樣物質(zhì)等,是與靶抗原有交叉反應的物質(zhì)。在用多抗測定抗原時(shí)對測定結果影響不大,但在用單克隆抗體測定抗原時(shí) ,假如交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對應的靶決定簇時(shí),也會(huì )出現假陽(yáng)性結果。
              7、標本中其它成分的影響
              血清脂質(zhì)過(guò)高、血紅蛋白及粘度過(guò)大等,均對ELISA測定結果有干擾作用。

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