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              人血小板衍化生長(cháng)因子AB(PDGF-AB) ELISA檢測試劑盒 使用說(shuō)明書(shū)

              更新時(shí)間:2024-04-11      瀏覽次數:101

              本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫學(xué)診斷

              Human血小板衍化生長(cháng)因子AB(PDGF-AB)

              ELISA檢測試劑盒

              使用說(shuō)明書(shū)

              檢測原理

              試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被血小板衍化生長(cháng)因子B(PDGF-AB)抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過(guò)溫育并徹-底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血小板衍化生長(cháng)因子B(PDGF-AB)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長(cháng)下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

              樣品收集、處理及保存方法

              1.  血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

              2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

              3.  細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

              4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

              5.  保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

              自備物品

              1. 酶標儀(450nm)

              2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

              3. 37℃恒溫箱

              操作注意事項

              1.  試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì )有結晶,這屬于正?,F象,水浴加熱使結晶完-全溶解后再使用。

              2.  實(shí)驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

              3.  濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說(shuō)明書(shū)操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5倍,最終結果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。

              4.  嚴格按照說(shuō)明書(shū)中標明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

              5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

              試劑盒組成

              名稱(chēng)

              96孔配置

              48孔配置

              備注

              微孔酶標板

              12孔×8條

              12孔×4條

              無(wú)

              標準品

              0.3mL*6管

              0.3mL*6管

              無(wú)

              樣本稀釋液

              6mL

              3mL

              無(wú)

              檢測抗體-HRP

              10mL

              5mL

              無(wú)

              20×洗滌緩沖液

              25mL

              15mL

              按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋

              底物A

              6mL

              3mL

              無(wú)

              底物B

              6mL

              3mL

              無(wú)

              終止液

              6mL

              3mL

              無(wú)

              封板膜

              2張

              2張

              無(wú)

              說(shuō)明書(shū)

              1份

              1份

              無(wú)

              自封袋

              1個(gè)

              1個(gè)

              無(wú)

              注:標準品(S0-S5)濃度依次為:0、250、500、1000、2000、4000 pg/mL

              試劑的準備

               20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1:20稀釋?zhuān)?份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

              洗板方法

              1.  手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。

              2.  自動(dòng)洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

              操作步驟

              1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

              2.  設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

              3.  樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。

              4.  除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

              5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

              6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

              7.  每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長(cháng)處測定各孔的OD值。

              結果判斷

               繪制標準曲線(xiàn):在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線(xiàn)性回歸曲線(xiàn),按曲線(xiàn)方程計算各樣本濃度值。

               

              試劑盒性能

              1.  準確性:標準品線(xiàn)性回歸與預期濃度相關(guān)系數R值,大于等于0.9900。

              2.  靈敏度:最-低檢測濃度小于10 pg/mL。

              3.  特異性:不與其它可溶性結構類(lèi)似物交叉反應。

              4.  重復性:板內、板間變異系數均小于15%。

              5.  貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

              6.  有效期:6個(gè)月

              免責聲明

              1.   試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實(shí)驗或體實(shí)驗,否則所產(chǎn)生的一切后果,由實(shí)驗者承擔,本公司概不負責。

              2.   嚴格按照說(shuō)明書(shū)操作,實(shí)驗者違反說(shuō)明書(shū)操作,后果由實(shí)驗者承擔。

               

               

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