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              技術(shù)文章/ Technical Articles

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              • 2024

                6-20

                人間充質(zhì)干細胞無(wú)血清培養基培養條件:1、合適的小鼠源細胞培養基是體外細胞生長(cháng)增殖的重要的條件之一,培養基不僅提供細胞營(yíng)養和促使細胞生長(cháng)增殖的基礎物質(zhì),而且還提供培養細胞生長(cháng)和繁殖的生存環(huán)境。2、優(yōu)質(zhì)血清目前,大多數合成培養基都需要添加血清。血清是細胞培養液中重要的成分之一,含有細胞生長(cháng)所需的多種生長(cháng)因子及其它營(yíng)養成分。3、無(wú)菌無(wú)毒細胞培養環(huán)境無(wú)菌無(wú)毒的操作環(huán)境和培養環(huán)境是保證細胞在體外培養成功的首要條件。在體外培養的細胞由于缺乏對微生物和有毒物的防御能力,一旦被微生物或有毒物...

              • 2024

                6-20

                聚合酶鏈反應技術(shù)(Polymerasechainraction,PCR)是一種在體外擴增特定DNA片段的方法,具有特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡(jiǎn)便、重復性好、易自動(dòng)化等突出優(yōu)點(diǎn),可用很短時(shí)間使目的基因或某一片段擴增十萬(wàn)乃至幾百萬(wàn)倍。PCR反應基本步驟:1、變性:根據DNA高溫變性的原理,將反應體系溫度升至變性溫度(高于模板熔點(diǎn),約95℃),使目的DNA雙鏈裂解成PCR模板(單鏈)。[95℃,30s]2、退火:將反應體系溫度驟降至退火溫度(低于引物熔點(diǎn)約55℃),是PCR引物與P...

              • 2024

                6-20

                影響抗原抗體反應的兩個(gè)因素:1、反應物自身的因素抗體:不同來(lái)源的抗體,反應性各有差異,抗體的濃度、特異性和親和力都影響抗體抗原反應,為提高試驗的可靠性,應選擇高特異性、高親和力的抗體作診斷試劑.等價(jià)帶的寬窄也影響抗原抗體復合物的形成,單克隆抗體不適用于沉淀反應.抗原:抗原的理化性狀、分子量、抗原決定簇的種類(lèi)及數目均可影響反應結果.顆粒性抗原出現凝集反應,可溶性抗原出現沉淀反應,單價(jià)抗原與相應抗體結合不出現沉淀現象.2、反應環(huán)境條件酸堿度:抗原抗體反應必須在合適的pH環(huán)境中進(jìn)行...

              • 2024

                6-14

                在培養細胞的實(shí)驗中,難免培養的細胞被污染了,得不到想要的實(shí)驗結果,那么你知道細胞培養的污染來(lái)源有哪些嗎?細胞培養過(guò)程中污染的來(lái)源主要有以下幾條途徑:一、不潔的動(dòng)物組織標本很多動(dòng)物組織本該是無(wú)菌的(直接與外界相通的呼吸道和消化道、泌尿系統除外),但由于取材時(shí)不小心也會(huì )有污染的機會(huì )。組織本身含有細菌,如取材時(shí)不用濃的抗生素洗液洗滌浸泡,也會(huì )帶菌,造成細胞污染。二、空氣空氣中含有大量的微生物,如果操作室與外界隔離不嚴或消毒不充分下,很容易造成污染。另外,凈化工作臺使用過(guò)久,濾板未定...

              • 2024

                6-14

                抗體保存溫度和條件抗體的保存方法一般會(huì )直接影響抗體的活性和使用效果。在保存得當的情況下,大部分抗體可以存放數月甚至數年,一般情況需嚴格按照抗體說(shuō)明書(shū)來(lái)進(jìn)行保存??贵w保存溫度和條件:1、抗體收到后,需在12000rpm離心1~5分鐘,再打開(kāi)管蓋進(jìn)行分裝和保存,如果抗體體積不足50ul,可延長(cháng)離心時(shí)間至5分鐘,從而確??贵w全部離心下來(lái)。2、對于多數抗體而言,分裝成小等份并凍存于-20℃或-80℃是zuijia選擇。腹水形式的產(chǎn)品收到后需立即凍存,因為該類(lèi)產(chǎn)品含有大量的蛋白酶,長(cháng)期...

              • 2024

                6-14

                ELISA酶聯(lián)免疫吸附試驗的標準程序,通常是把蛋白、抗體、或激素等(即抗原)直接或是以捕捉抗體(captureAb)固定在固相載體上,再加入一級檢測抗體(primarydetectionAb),形成一個(gè)抗原抗體的復合物。如果該抗體已經(jīng)用酶(enzyme)標記了,即可用來(lái)直接測定抗原的量,若無(wú),則可利用另一個(gè)酶標記的二級抗體來(lái)測定抗原的量。測定抗原量的方法是加入該酶的底質(zhì)(substrate),作用后產(chǎn)生出現的顏色深淺和樣本中的抗原量呈正比的關(guān)系,依此原理計算出樣本中的抗原總量...

              • 2024

                6-14

                佰利萊生物為您講解PCR反應效率低值解析反應效率視為實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析設計和優(yōu)化的關(guān)鍵因素。利用標準曲線(xiàn)(通過(guò)對目標模板進(jìn)行連續梯度稀釋獲得)獲取效率值。該效率值可作為總反應的“健康”標志。低效率與高效率所造成的影響有所不同。改善上述兩種情形的步驟則相差甚遠。理想的反應效率為100%,但反應效率在90–110%范圍內都是可以接受的。確定某個(gè)特定的分析效率是否低下的方法是稀釋模板生成標準曲線(xiàn)(模板稀釋的范圍應涵蓋所有未知樣本),然后查看該范圍內的效率。它應盡可能接近100%...

              • 2024

                6-14

                ELISA檢測試劑盒試驗溫育解讀在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應,即加酶結合物和顯色劑后??乖贵w反應的完成需要有一定的溫度和時(shí)間,這一保溫過(guò)程稱(chēng)為溫育(incubation),有人稱(chēng)之為孵育。溫育的時(shí)間選擇:溫育這一步是ELISA測定中最容易出現問(wèn)題的步驟。目前國內ELISA試劑盒的反應溫育時(shí)間為37℃30分鐘-1小時(shí),進(jìn)口ELISA試劑盒則通常為37℃1-2小時(shí)才能有較wan全的結合,低于1小時(shí),可能會(huì )影響測定下限。ELISA屬固相免疫測定,抗原、抗體的結合只在固相表...

              • 2024

                5-30

                ELISA試劑盒結果判定:1、結果的判定嚴格依據試劑盒提供的陽(yáng)性判定值(CO)進(jìn)行結果判定。廠(chǎng)商提供試劑的同時(shí),說(shuō)明書(shū)上列出的CO值是建立在一系列科學(xué)試驗及統計研究的基礎上,不應隨意更改。定量測定需要制備標準曲線(xiàn),根據標準曲線(xiàn)計算結果。2、灰區的設置通常情況下ELISA結果報告方式為“陰性"或“陽(yáng)性",在二者之間有一條明確的分界線(xiàn),也就是所謂的陽(yáng)性判定值即CO值,對于樣本的吸光度值(A)高于CO值就判斷為陽(yáng)性,相反則判斷為陰性,然而在實(shí)際工作中經(jīng)常會(huì )出現樣本A值位于CO值附近...

              • 2024

                5-20

                細胞是生命的基本單位。(除了病毒外。)細胞由細胞核組成和細胞膜還有線(xiàn)粒體等組成。(除個(gè)別生物)小到細菌大至鯨魚(yú)。都由細胞組成。細胞培養實(shí)用技巧總括:1.買(mǎi)細胞要去正規的地方購買(mǎi),一般產(chǎn)品資料上面會(huì )有針對細胞的詳細介紹,這樣在培養之前可以了解細胞正常生長(cháng)的狀態(tài)圖、傳代、培養基的類(lèi)型等。2.不管是買(mǎi)的細胞,還是他人惠贈的細胞,剛拿到手需要趕緊做的兩件事:一檢測是否有支原體污染;二迅速擴增凍存,凍存細胞復蘇后第二天更換一次培養基。3.發(fā)現細胞有污染迅速處理掉,特別是當養了很多種細胞...

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